Cūku cirkovīrusa tipa-Ⅱ antivielu ELISA noteikšanas komplekts ir paredzēts specifisku PCV antivielu noteikšanai cūkas serumā in vitro. Testu izmanto, lai novērtētu vakcinēto no cūku fermu imunizācijas ar cūku cirkovīrusa tipa -Ⅱ vakcīnu.
Paraugs:serums
Nodrošinātie materiāli:
Pārbaudes procedūras un interpretācija
1. SOLIS Pārbaudes procedūra
1.1 Mazgāšanas šķīduma sagatavošana
Darba koncentrācijas mazgāšanas šķidrums: Pirms lietošanas mazgāšanas šķīdums jāatjauno līdz istabas temperatūrai (20-25 grādi) un vienmērīgi jāsakrata, lai tas būtu viendabīgs. Pēc tam koncentrēto mazgāšanas šķīdumu 20 reizes atšķaida ar attīrītu ūdeni (piemēram, 95 ml attīrīta ūdens pievieno 5 ml koncentrēta mazgāšanas šķīduma), labi samaisa, un atšķaidīto mazgāšanas šķidrumu var uzglabāt 2-8 grādu temperatūrā 7 dienas.
1.2. Parauga sagatavošana
① Tika ņemtas veselas dzīvnieka asinis, centrifugētas ar ātrumu 4000 apgr./min 10 minūtes un savākts supernatants. Serumu var koagulēt arī dabiski bez hemolīzes.
② Atšķaida seruma paraugu attiecībā 1:25 (pievieno 5 ul seruma paraugu 120 ul parauga šķīdinātāja) un rūpīgi samaisa.
Piezīme: Negatīvās un pozitīvās kontroles nav jāatšķaida.
1.3. Fermentu konjugāta sagatavošana
Atšķaidiet fermentu konjugātu attiecībā 1:25 (pievienojiet 5 ul fermentu konjugāta 120 ul fermentu šķīdinātāja) un rūpīgi samaisiet.
1.4 Pārbaudes procedūra
①Paņemiet enzīma etiķetes mikroplati (atbilstoši paraugu skaitam, to var izjaukt un izmantot vairākas reizes), pievienojiet 100 ul atšķaidītā seruma enzīma etiķetes Microplate, iestatiet divas iedobes katrā negatīvajiem un pozitīvajiem paraugiem un pievienojiet 100 ul katrai negatīvajai un pozitīvajai kontrolei reakcijas iedobē. Viegli sakratiet paraugu iedobē, izmantojot blīvējošās plāksnes plēvi, lai pārklātu plāksni, un inkubējiet 37 grādu temperatūrā 30 minūtes.
②Atveriet blīvējošās plāksnes plēvi, izkratiet šķīdumu plāksnes iedobē, pievienojiet katrai iedobei 300 µl darba koncentrācijas mazgāšanas šķidruma un pēc tam izmetiet iedobē esošo šķidrumu. Atkārtojiet iepriekš minētās darbības 5 reizes un beidzot nosusiniet uz tīra absorbējoša papīra.
③ Pievienojiet 100 µl enzīma konjugāta katrai iedobei, pārklājiet plati un inkubējiet 37 grādu temperatūrā 45 minūtes.
④Atveriet blīvējošās plāksnes plēvi, nokratiet šķīdumu plāksnes iedobē, pievienojiet katrai iedobei 300 µl darba koncentrācijas mazgāšanas šķidruma un pēc tam izmetiet iedobē esošo šķidrumu. Atkārtojiet iepriekš minētās darbības 5 reizes un beidzot nosusiniet uz tīra absorbējoša papīra.
⑤Katrā iedobē pievienojiet 100 µl substrāta šķīduma, pārklājiet plāksni un inkubējiet 10 minūtes 37 grādu temperatūrā prom no gaismas.
⑥Katrā iedobē pievienojiet 50 µl apturēšanas šķīduma un nosakiet rezultātu 5 minūšu laikā.
2. SOLIS Rezultātu interpretācija
Katras iedobes OD450 vērtība tika nolasīta 96 iedobju mikroplašu lasītājā.
2.1. Validācija
Negatīvās kontroles vidējā OD450nm vērtība bija<0.1 and the average OD450nm value of positive control /the average OD450nm value of negative control was ≥5, the experimental results were valid. Otherwise, the test should be repeated.
2.2. Aprēķina metode
Katram paraugam S/P aprēķina šādi, izmantojot koriģētās parauga un kontroles vērtības:
S/P=(ODPARAUGS-ODNC) / (ODPC-ODNC)
2.3. Rezultātu interpretācija
Kad S/P<0.15, it is judged as negative.
Ja S/P ir lielāks par vai vienāds ar 0,25, tas tiek uzskatīts par pozitīvu.
Ja 0,15 ir mazāks par S/P vai vienāds ar to<0.25, it is judged as suspicious, and suggest to repeat sampling and test one week later.
Populāri tagi: cūku cirkovīrusa tipa -ⅱ antivielu elisa noteikšanas komplekts, Ķīnas cūku cirkovīrusa tipa -ⅱ antivielu elisa noteikšanas komplekta piegādātāji, ražotāji, rūpnīca
