Brucella antivielu ELISA KIT

Specifikācija

 

Testa procedūras un interpretācija

 

1. solis testa procedūra

1.1 Mazgāšanas šķīduma sagatavošana

WOrking koncentrācija washing šķidrums:Pirms lietošanas mazgāšanas šķīdums ir jāatjauno līdz istabas temperatūrai (20-25 grāds) un vienmērīgi jātrako, lai tas būtu vienāds. Pēc tam 20 reizes atšķaidiet koncentrēto mazgāšanas šķīdumu ar attīrītu ūdeni (piemēram, 5 ml koncentrētu mazgāšanas šķīdumu pievieno 95 ml attīrītam ūdenim), labi samaisiet, un atšķaidītu mazgāšanas šķidrumu var uzglabāt 2-8 grādu 7 dienas.

1.2 Parauga sagatavošana

Tika ņemtas ar dzīvnieku asinīm, 10 minūtes centrifugēja pie 4000 apgriezieniem un tika savākts supernatants. Serumu var arī koagulēt dabiski bez hemolīzes.

② Kad izlases lielums ir liels, lai nodrošinātu, ka eksperimentālās reakcijas laiks ir konsekvents. Seruma paraugu sajauc ar antivielu darba šķīdumu 1: 1 atšķaidīšanas plāksnē (70UL seruma paraugs + 70 UL antivielu darba šķīdums). Negatīvā kontrole un pozitīvā kontrole ir tāda pati kā seruma paraugam.

1.3 Testa procedūra

①Take Fermenta etiķetes mikroplate (saskaņā ar paraugu skaitu var izjaukt un izmantot vairākas reizes), iestatīt divas iedobes katra negatīvai un pozitīvai kontrolei, pievienojiet fermentu etiķetes mikroplatam 100UL pirmiz obligātā maisījuma. Viegli sakratiet paraugu urbumā, izmantojot plāksnes plēvi, lai pārklātu plāksni, un inkubējiet 37 grādos 30 minūtes.

② Atveriet blīvējuma plāksnes plēvi, sakratiet šķīdumu plāksnē aku, pievienojiet 300 µl strādājošas koncentrācijas mazgāšanas šķidruma katrai iedobei un pēc tam izmetiet šķidrumu akā. Atkārtojiet iepriekš minētās darbības 5 reizes un visbeidzot nosusiniet uz tīra absorbējoša papīra.

③Dfermentu konjugāts:Atšķaidiet fermenta konjugātu (50 ×) 50 reizes (piemēram: 20UL enzīmu konjugāta koncentrāts + 980 UL atšķaidītais 1, nepieciešamo daudzumu aprēķina pēc testa paraugu skaita), labi samaisiet un atceļ.

④Add 100 µl enzīma konjugāts ar katru iedobi, pārklāj plāksni un inkubē 37 grādos 30 minūtes.

⑤ mazgājošā enzīma plāksne, īpašā darbība ir tāda pati kā iepriekšminētajai ②.

⑥Add 100µL substrāta šķīdums katrai iedobei, pārklāj plāksni un inkubē 10 minūtes 37 grādu attālumā no gaismas.

⑦Add 50 µl apturēšanas šķīdums katrai iedobei un nosakiet rezultātu 5 minūšu laikā.

 

2. solis Rezultāta interpretācija

 

Katras urbuma OD450 vērtība tika nolasīta uz 96- akas mikroplašu lasītāja.

2.1 validācija

 

Vidējā OD45 0 NM pozitīvās kontroles vērtība bija <0,35, un negatīvās kontroles/pozitīvās kontroles vidējā OD450NM vērtība bija lielāka vai vienāda ar 3,5, eksperimentālie rezultāti bija derīgi. Pretējā gadījumā pārbaude jāatkārto.

2.2 Aprēķina metode

Katram paraugam aprēķiniet PI (bloķēšana ATE) šādi, izmantojot koriģēto paraugu un vadības vērtības:

2.3 Rezultātu interpretācija

Kad pi <20%, tas tiek vērtēts kā negatīvs.

Kad pi> 30%, to vērtē kā pozitīvu.

Kad par 20% mazāk vai vienāds ar PI, kas ir mazāks vai vienāds ar 30%, tas tiek uzskatīts par aizdomīgu un iesaka atkārtot paraugu ņemšanu un pārbaudīt nedēļu vēlāk.

Populāri tagi: Brucella antivielu ELISA KIT, Ķīnas Brucella antivielu ELISA komplekta piegādātāji, ražotāji, rūpnīca