Vistas adrenomedulīna (ADM) reaģenta sagatavošana un prasības

1. Serums: koagulācija istabas temperatūrā 10-20 min, centrifugēšana 20 minūtes ar ātrumu 2000-3000 r.pm. Rūpīgi savāc centrifugātu un centrifugē vēlreiz, ja uzglabāšanas laikā parādās nokrišņi.

2. Plazma: par antikoagulantu jāizvēlas EDTA vai nātrija citrāts atbilstoši parauga prasībām. Pēc sajaukšanas 10-20 minūtes centrifugē 20 minūtes ar ātrumu 2000-3000 r.pm. Rūpīgi savāc centrifugātu un atkal centrifugē, ja uzglabāšanas laikā veidojas nokrišņi.

3. Urīns: savāc ar sterilu mēģeni, centrifugē 20 minūtes ar ātrumu 2000-3000 r.pm. Rūpīgi savāc centrifugātu un atkal centrifugē, ja uzglabāšanas laikā veidojas nokrišņi. Krūškurvja un vēdera šķidrums, cerebrospinālā šķidruma atsauces implementācijas.

4. Šūnu kultūras virsslānis: konstatējot eksudējošus komponentus, savāc ar sterilu cauruli. Centrifugē 20 minūtes ar ātrumu 2000-3000 r.pm. Rūpīgi savāc supernatantu. Nosakot komponentus šūnās, šūnu suspensija tika atšķaidīta ar PBS (pH 7,2-7,4), un šūnu koncentrācija sasniedza aptuveni 1 miljonu/ml. Atkārtoti sasaldējot un atkausējot, šūnas tiek iznīcinātas un intracelulārās sastāvdaļas tiek atbrīvotas. Centrifugē 20 minūtes ar ātrumu 2000-3000 r.pm. Rūpīgi savāc supernatantu. Ja konservēšanas laikā veidojas nokrišņi, centrifugē vēlreiz.

5. Audu paraugs: Pēc parauga griešanas nosver to. Pievienojiet noteiktu daudzumu PBS, PH7.4. Ātra kriokonservēšana šķidrajā slāpeklī vēlākai izmantošanai. Pēc izkausēšanas paraugs paliek 2-8 °C temperatūrā. Tika pievienots noteikts PBS daudzums (PH7.4), un paraugs tika pilnībā homogenizēts ar rokām vai ar homogenizatoru. Centrifugē 20 minūtes ar ātrumu 2000-3000 r.pm. Rūpīgi savāc supernatantu. Sadaliet vienu testēšanai un pārējo iesaldējiet rezervei.

6. Paraugi jāiegūst iespējami drīz pēc savākšanas. Ekstrakcija jāveic saskaņā ar attiecīgo literatūru, un eksperimenti jāveic pēc iespējas ātrāk pēc ekstrakcijas. Ja testu nevar veikt nekavējoties, paraugu var uzglabāt -20 °C temperatūrā, bet jāizvairās no atkārtotas sasaldēšanas un atkausēšanas.

7. Nevar noteikt paraugu, kas satur NaN3, jo NaN3 inhibē HRP aktivitāti.