Ko ELISA komplekts ņem vērā attiecībā uz apstrādi un saglabāšanu

ELISA komplektā parasti pievieno trīs posmus: paraugu, fermentu sadarbību un substrātu. Pievienojot paraugus, piedeva jāpievieno ELISA komplekta plāksnes atveres apakšā, lai novērstu tās pievienošanu cauruma sienas augšējai daļai, un jāuzmanās, lai tā neizšļakstītos, ne burbuļotu. Paraugu parasti pievieno ar mikrosamplieri, atkarībā no plāksnes cauruma parastā daudzuma. Sūkšanas sprausla jānomaina katru reizi, kad tiek pievienots paraugs, lai novērstu krustenisko inficēšanos. Paraugu pievienošanai var izmantot arī vienreizējās lietošanas kvantitatīvo plastmasas cauruli.

ELISA komplekta apstrādē un saglabāšanā tiek ņemti vērā šādi aspekti:

1, jāpievērš uzmanība smagas hemolīzes novēršanai. Hemoglobīns satur heme grupas, kurām ir līdzīga aktivitāte kā peroksīdiem. Tāpēc ELISA komplektā ar HRP kā simbolu enzīmu, ja hemoglobīna koncentrācija seruma paraugā ir augsta, tā vienkārši tiks adsorbēta uz cieto fāzi vairošanās procesā, tādējādi atspoguļojot krāsu ar vēlāk pievienoto HRP substrātu.

2. Paraugu ņemšanas un seruma atdalīšanas laikā jāpievērš uzmanība, lai pēc iespējas novērstu bakteriālu piesārņojumu. Dažiem fermentiem, ko izdala baktērijas, audzējot var būt diferenciācijas ietekme uz antigēniem, antivielām un citiem proteīniem. No otras puses, daži baktēriju endogēnie enzīmi, piemēram, escherichia coli β-galaktozidāze, nespecifiski traucēs noteikšanas metodei, izmantojot attiecīgo fermentu kā simbolu.

3. Ja seruma paraugs tiek atdalīts ar aseptisku darbību, to var uzglabāt 2 ~ 8 °C temperatūrā nedēļu. Ja to operē ar baktērijām, ieteicams sasaldēt. Paraugi ilgstoši jāuzglabā temperatūrā līdz -70°C.

4. Jāpievērš uzmanība atkārtotas sasalšanas un atkausēšanas novēršanai, ko izraisa strāvas padeves pārtraukums sasalušajiem konservētajiem seruma paraugiem. Parauga atkārtotais bīdes spēks iznīcinās olbaltumvielas un citas molekulas paraugā, kā rezultātā ELISA komplekts radīs kļūdaini negatīvus rezultātus. Turklāt uzmanība jāpievērš arī saldēšanas un atkausēšanas paraugu sajaukšanai. Nedrīkst veikt vardarbīgu vibrāciju, un sajaukšana jāatkārto un jāapvērš.

5. Duļķainuma vai flokulenta gadījumā, ko izraisa bakteriāls piesārņojums paraugu konservēšanas laikā, centrifugāts jāņem noteikšanai pēc centrifugēšanas nogulsnēšanās.